2-[[2-Etossi-4-(4-idrossi-1-piperidinil) fenil]amino]-5,11-diidro-5,11-dimetil-6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-

Descrizione del prodotto:

Nome del prodotto: 2-[[2-Etossi-4-(4-idrossi-1-piperidinil) fenil]amino]-5,11-diidro-5,11-dimetil-6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-one CAS NO:1234480-50-2

Sinonimi:

XMD 8-92 (base libera);

6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-uno,2-[[2-etoxi-4-(4-idrossi-1-piperidinyl)fenil]amino]-5,11-diidro-5,11-dimetil-;

Proprietà chimiche e fisiche:

Aspetto: polvere bianca a bianchissima

Assay: ≥98,0%

Densità:1.3 g/cm3

Punto di ebollizione:7410,8°C a 760 mmHg

Punto di scoppio:4020,4°C

In vitro

XMD8-92 mostra la più grande affinità verso BMK1 con una costante di dissociazione (Kd) di 80 nM, mentre DCAMKL2, TNK1 e PLK4 mostrano Kd?? di 190, 890 e 600 nM, rispettivamente.XMD8-92 è profilato contro tutte le chinasi rilevabili nei lisati cellulari HeLa utilizzando il metodo KiNativ ed è risultato essere circa 10 volte più selettivo per BMK1 con un IC50 di 1..5 μM rispetto ai più potenti non bersagli, TNK1 (IC50=10 μM) e ACK1 (aka TNK2, IC50=18 μM).MEK5 non è significativamente inibito da XMD8-92 fino a 50 μM [1]. XMD8-92 mostra una elevata selettività verso BMK1 in un test in vitro di legame in competizione al sito ATP contro le 402 chinasi e nel metodo KiNativ contro tutte le chinasi rilevabili nei lisati cellulari HeLa.XMD8-92 blocca l' attivazione di BMK1 indotta da EGF con IC50 di 240 nM e, con concentrazioni fino a 5 μM, XMD8-92 non ha alcun effetto inibitore sull'attivazione di ERK1/2 da parte dell'EGF[2].

In vivo

XMD8-92 inibisce significativamente la crescita tumorale in vivo del 95%. La farmacocinetica di XMD8-92 è stata valutata nei ratti Sprague-Dawley somministrati una singola dose endovenosa o orale.0 ore clearance di emivita di 26 mL/min/kgXMD8-92 ha una distribuzione tissutale moderata con un volume di distribuzione calcolato di 3,4 L/ kg.Dopo una dose orale singola di 2 mg/kg, le concentrazioni plasmatiche massime di circa 500 nM sono osservate dopo 30 minuti, con 34 nM rimanenti 8 ore dopo la dose.le elevate concentrazioni plasmatiche del farmaco (circa 10 μM dopo un dosaggio IP di 50 mg/kg) sono mantenute per tutti i 14 giorni. XMD8-92 sembra essere ben tollerato e i topi sembravano sani senza segni di disagio. Nessuna instabilità vascolare è stata osservata nei topi trattati con XMD8-92 [1].Il trattamento con XMD8-92 in topi sia immunocompetenti che immunodeficienti ha bloccato la crescita dei tumori da xenotrapianto polmonare e cervicale., rispettivamente, del 95%. This remarkable anti-tumor effect of XMD8-92 in lung and cervical xenograft tumor models is due to XMD8-92’s capacity to inhibit tumor cell proliferation through the PML suppression-inducted p21 checkpoint proteinInoltre, il knock-out (KO) di BMK1 nei topi porta alla rimozione completa e irreversibile della proteina BMK1,mentre il trattamento con XMD8-92 nei topi sopprime solo l' attività di BMK1In secondo luogo, l'instabilità vascolare osservata nei topi KO BMK1 può essere dovuta alla mancanza del dominio non chinasico C-terminale di BMK1.che è ancora presente durante il trattamento di animali con XMD8-92 [2].

Assaggio della chinasi

La profilazione KiNativ di XMD8-92 è effettuata sia con un ATP che con un ADP acilfosfato-desthiobiotina con le seguenti modifiche.I lisati di cellule HeLa (5 mg/ml di proteine totali) vengono incubati in presenza di XMD8-92 a 50 μM, 10 μM, 2 μM, 0,8 μM e 0 μM per 15 minuti prima dell'aggiunta della sonda di acilfosfato di ATP o ADP (5 μM di concentrazione finale della sonda).Le reazioni della sonda sono proseguite per 10 minuti e la reazione è stata interrotta con l'aggiunta di urea e trattata per l'analisi della SM.. Samples are analyzed by LC-MS/MS on a linear ion trap mass spectrometer using a time segmented “target list” designed to collect MS/MS spectra from all kinase peptide-probe conjugates that can be detected in HeLa cell lysatesQuesto elenco di obiettivi è generato e convalidato da un'analisi preliminare esaustiva dei lisati HeLa.Fino a quattro ioni di frammento caratteristici per ogni coniugato peptide-sonda di chinasi vengono utilizzati per estrarre segnali per ogni chinasi, e un confronto tra gli inibitori trattati e i lisati di controllo (non trattati) consentono di determinare con precisione la percentuale di inibizione in ogni punto.Un manoscritto che descrive i dettagli di questo approccio di spettrometria di massa mirata è in preparazione [1].

Amministratore animale

Topi[1] Le cellule HeLa 5×105 vengono risospese in DMEM e iniettate sottocutaneamente nel fianco destro dei topi Nod/Scid di 6 settimane (giorno 0).I topi sono stati randomizzati in 2 gruppi (6 animali)Il gruppo XMD8-92 (1-28 giorni) è trattato con XMD8-92 alla dose di 50 mg/ kg due volte al giorno per via intraperitoneale.Il gruppo di controllo riceve quotidianamente iniezioni della soluzione portante come gruppo di controlloAl settimo giorno, il gruppo di controllo viene randomizzato in 2 gruppi (6 animali, XMD8-92, 7-28 giorni e 12 animali, controllo).il restante gruppo di controllo è randomizzato in 2 gruppi (6 animali)Il trattamento con XMD8-92 nei gruppi XMD8-92 (7-28 giorni) e XMD8-92 (14-28 giorni) è iniziato rispettivamente al 7° e al 14° giorno.La dimensione del tumore viene misurata con un' impugnatura, e viene determinato il volume del tumore[1].

Referenze:

[1] Yang Q, et al. L'inibizione farmacologica di BMK1 sopprime la crescita tumorale attraverso la proteina promyelocitica della leucemia.Cancer Cell. 2010 Sep 14;18(3):258-67.

Yang Q, et al. Targeting the BMK1 MAP kinase pathway in cancer therapy. Clin Cancer Res. 2011 Jun 1;17(11):3527-32.

[3] Umapatia G, et al. La chinasi ALK stimola la chinasi ERK5 per promuovere l'espressione dell'oncogene MYCN nel neuroblastoma. Sci Signal. 2014 Oct 28;7(349):ra102.

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